高壓液相色譜柱用途原理和維護

1.進樣系統 一般采用隔膜注射進樣器或高壓進樣間完成進樣操作，進樣量是恒定的。這對提高分析樣品的重復性是有益的。

2.輸液系統 該系統包括高壓泵、流動相貯存器和梯度儀三部分。高壓泵的一般壓強為l.47～4.4X107Pa，流速可調且穩定，當高壓流動相通過層析柱時，可降低樣品在柱中的擴散效應，可加快其在柱中的移動速度，這對提高分辨率、回收樣品、保持樣品的生物活性等都是有利的。流動相貯存錯和梯度儀，可使流動相隨固定相和樣品的性質而改變，包括改變洗脫液的極性、離子強度、PH值，或改用競爭性抑制劑或變性劑等。這就可使各種物質(即使僅有一個基團的差別或是同分異構體)都能獲得有效分離。

3.分離系統 該系統包括色譜柱、連接管和恒溫器等。色譜柱一般長度為10～50cm，內徑為2～5mm，由"不銹鋼或厚壁玻璃管或鈦合金等材料制成，住內裝有直徑為5～10μm粒度的固定相。固定相中的基質是由機械強度高的樹脂或硅膠構成，它們都有惰性、多孔性和比表面積大的特點，加之其表面經過機械涂漬，或者用化學法偶聯各種基因或配體的有機化合物。因此，這類固定相對結構不同的物質有良好的選擇性。

 

高壓液相色譜柱的維護

1、使用預柱保護分析柱；

2、盡量不超過該色譜柱的ph范圍；

3、避免流動相組成及極性的劇烈變化；

4、流動相使用前必須經脫氣和過濾處理；

5、如果使用極性或離子性的緩沖溶液作流動相，應在實驗完畢柱子沖洗干凈，并保存大乙腈中；

6、壓力升高是需要更換預柱的信號。