色譜法中常用定量方法分享

眾suo周知，色譜法能解決那些物理常數相近，化學性質類似的同系物、異構體等復雜多組分混合物的分離分析問題，既能鑒定化合物又能做定量測定。色譜法是根據色譜峰的面積或高度進行定量分析的。色譜定量計算方法很多，目前比較廣泛應用的有歸一化法、內標法和外標法三種。今天就由小編給大家簡單分享一下色譜法中常用的幾種定量方法。

由于組分的量與其峰面積成正比，如果樣品中所有組分都能產生信號，得到相應的色譜峰，那么可以用如下歸一化公式計算各組分的含量。

式中：C表示含量

         F表示校正因子

         A表示峰面積

若樣品中各組分的校正因子相近，可將校正因子消去，直接用峰面積歸一化進行計算。中國藥典用不加校正因子的面積歸一化法測定藥物中各雜質及雜質的總量限度。

優點：

1.簡單、快速的定量過程；

2.進樣量不要求嚴格。

缺點：

1.所有組分峰都要流出；

2.需測量所有的組分；

3.必須校正所有的峰。

選擇樣品中不含有的純物質作為對照物質加入待測樣品溶液中，以待測組分和對照物質的響應信號對比，測定待測組分含量的方法稱為內標法。“內標"的由來是因為標準（對照）物質加入到樣品中，有別于外標法。該對照物質稱為內標物。

在一個分析周期內不是所有組分都能流出色譜柱（如有難氣化組分），或檢測器不能對每個組分都產生信號，或只需測定混合物中某幾個組分的含量時，可采用內標法。

準確稱量W克樣品，再準確稱量W_s克內標物，加入至樣品中，混勻，進樣。測量待測組分i的峰面積A_i及內標物的峰面積A_s，則i組分在W克樣品中所含的重量W_i，與內標物的重量W_s，有下述關系：

待測組分i在樣品中的百分含量C%為：

對內標物的要求：

1.內標物是原樣品中不含有的組分，否則會使峰重疊而無法準確測量內標物的峰面積；

2.內標物的保留時間應與待測組分相近，但彼此能*分離(R≥1.5)；

3.內標物必須是純度合乎要求的純物質。

優點：

1.在進樣量不超限（色譜柱不超載）的范圍內，定量結果與進樣量的重復性無關。

2.只要被測組分及內標物出峰，且分離度合乎要求，就可定量，與其他組分是否出峰無關。

3.很適用于測定藥物中微量有效成分或雜質的含量。由于雜質（或微量組分）與主要成分含量相差懸殊，無法用歸一化法測定含量，用內標法則很方便。

缺點：加一個與雜質量相當的內標物。加大進樣量突出雜質峰，測定雜質峰與內標峰面積之比，即可求出雜質含量。但樣品配制比較麻煩和內標物不易找尋。

外標法是指按梯度添加一定量的標準品（對照品）于空白溶劑中制成對照樣品，與未知試樣平行地進行樣品處理并檢測。不同濃度的標準品進樣，以峰面積為值繪制成標準曲線，從而推算出未知試樣中被測組分濃度的定量方法外標法在操作上可分為校正曲線法和校正因子求算法。

校正曲線法：取純物質配成不同濃度的標準溶液，利用色譜儀作出峰面積和濃度的關系標準曲線。通過標準曲線直接查出待測組分濃度。

校正因子求算法：是將標樣多次分析后得到響應信號與其含量求出它的絕對校正因子，再根據公式求出待測樣品中的含量。

式中：C表示含量

         F表示校正因子

         A表示峰面積

優點：操作和計算簡便，無需所有峰都能被檢測到。

缺點：進樣量必須準確，儀器要求具有良好的穩定性。