提效減耗！HPLC方法如何轉換為UHPLC方法？

● 相同的選擇性：選擇相同品牌，相同鍵合工藝制成的填料僅僅是粒徑不一致。

● 相同或者更大的柱長粒徑比：這是保證具有相當或者更高的理論塔板數。

2. 樣品濃度不改變，進樣體積與柱體積成正比

例如：

HPLC柱：4.6*150mm，5μm 進樣體積：20μL

UHPLC柱：2.1*100mm，進樣體積則為：

3. 梯度洗脫程序的轉換

等度方法只需要調整流速和進樣量，如果是梯度洗脫則需調整梯度洗脫程序。調整的依據，需計算在幾何縮放的流速下輸送相同倍數柱體積溶劑到目標柱需要的時間。

同時，由于不同儀器之間系統體積存在差異，也需要在轉換時加以考慮。梯度程序轉換的計算過程這里不做詳細描述。通常色譜儀器均配備轉換軟件，輸入原始洗脫程序，軟件可自動計算并轉換為目標儀器的洗脫，然后根據色譜峰分離情況進行人工微調。

1. 改善分離度：調整梯度洗脫程序，增加長度是便捷可行的措施；

2. 如果破壞試驗檢測的雜質情況不一致，轉換后的雜質多且物料平衡優于前者，兩者測定結果沒有明顯區別，轉換成功；

3. 如果結果明顯不一致，或涉及不合格情況，應匯報相關負責人，是否需要對原方法進行再評估或放棄方法轉換。

1. 原則：系統適用性實驗不符合要求；

2. 分離度調整后達不到要求；

3. 破壞性實驗檢測出來物料平衡明顯不如HPLC法，方法優化后不能解決；

4. 檢測結果與HPLC不一致，甚至出現不合格，那需要對原方法進行評估或者放棄方法轉換。

1. 原則：系統適用性實驗符合要求；

2. 峰純度達到要求；

3. 分離度達到要求；

4. 靈敏度達到要求；

5. 沒有系統適用性要求的項目進行樣品2-3種條件的破壞性實驗，雜質分離和物料平衡均要相當。