方法開發(fā)，流動(dòng)相的選擇是關(guān)鍵

除了常用的甲醇和乙腈外，偶爾還會(huì)用到異丙醇/乙醇/叔丁醇、四氫呋喃。這些反相不常用的溶劑通常與甲醇或者乙腈混合使用，添加比例在20%左右。由于醇類結(jié)構(gòu)隨著C含量增多，粘度會(huì)越來(lái)越大，因此當(dāng)使用較高比例時(shí)應(yīng)特別注意流速不能過大，否則可能會(huì)超過色譜柱耐壓而導(dǎo)致柱子損壞；四氫呋喃由于易被氧化通常含有抗氧化劑BHT（2,6-二叔丁基對(duì)甲酚），含有BHT的四氫呋喃截止波長(zhǎng)約為260 nm，因此當(dāng)使用低波長(zhǎng)條件而且必須使用四氫呋喃時(shí)，則必須選擇不含有BHT的四氫呋喃，且最好現(xiàn)開瓶現(xiàn)用，否則放置過久的四氫呋喃形成過氧化物可能會(huì)造成某些化合物降解且基線亦會(huì)漂移，另外四氫呋喃對(duì)于peek材質(zhì)有一定的溶脹作用，流動(dòng)相中含有四氫呋喃時(shí)應(yīng)避免使用peek管路及peek接頭。

那么，什么時(shí)候會(huì)用到這類特殊的有機(jī)相呢？在甲醇與乙腈以及混合的流動(dòng)相嘗試過后還無(wú)法分離的雜質(zhì)，可以嘗試這類特殊的有機(jī)相，特別是對(duì)于非對(duì)映異構(gòu)體、位置取代異構(gòu)體等等常規(guī)反相較難分離的結(jié)構(gòu)，可能會(huì)取得意想不到的效果。

有機(jī)相的種類相對(duì)簡(jiǎn)單，緩沖鹽的選擇則五花八門。總體來(lái)說(shuō)，常見的類型有：磷酸鹽、乙酸鹽/甲酸鹽、碳酸鹽，傳統(tǒng)的離子對(duì)試劑：烷基磺酸鈉、四丁基銨鹽，如今比較“流行"的離液劑：六氟磷酸鹽、高氯酸鹽、硫酸鹽以及曾經(jīng)流行的氯化鹽等。