Ultimate® SEC色譜柱的使用說明書

Ultimate® SEC色譜柱性能介紹
Ultimate® SEC色譜柱是硅膠基質的體積排阻色譜柱，其色譜填料為高純度、具有良好穩定性的硅膠微球表面鍵合親水性高分子聚合物。月旭公司采用特殊的表面修飾技術，確保了該填料具有良好的穩定性和批次之間的較好重現性。
Ultimate® SEC填料采用*的化學鍵合技術，在硅球表面鍵合了親水性聚合物以及親水性二醇基官能團。雙重鍵合機制使水溶性高分子聚合物、蛋白、生物酶、多肽等生物樣品的非特異性吸附極小，廣泛應用于水溶性聚合物及生物大分子的分離和測定。

Ultimate® SEC色譜柱性能介紹

Ultimate® SEC色譜柱使用步驟：
1.將Ultimate® SEC色譜柱連接在HPLC系統上；
2.設置流速在0.8-1.0mL/min，首先用純水相平衡至少40min，然后用所使用的有機溶劑平衡至少30mi；
3.使用完畢后，先用純水相沖洗色譜柱至少40min以上，然后用高比例的有機相沖洗至少30min。

Ultimate® SEC色譜柱使用注意事項
1.使用前，請把色譜柱用純水沖洗40-60個柱體積，以確保柱填料能夠充分被潤濕，防止色譜柱在使用過程中造成固定相塌陷；
2.色譜柱在用純水流動相分析時，需要充分地用純水流動相平衡色譜柱，待基線充分平穩后進樣分析；
3.由于該類型色譜柱一般用的流動性是純水相的緩沖鹽，因而色譜柱在使用完以后需要用純水流動相充分沖洗色譜柱，以保證緩沖鹽被充分的清除，防止緩沖鹽對色譜柱固定相造成的傷害；
4.長時間不使用色譜柱時，請將該類型色譜柱保存在高比例的有機溶劑-水溶液中，一般有機溶劑的比例為90%。

Ultimate® SEC色譜柱樣品與流動相
為了避免色譜柱的堵塞，所有的流動相和樣品都必須用0.45μm或0.2μm的濾膜過濾后使用。Ultimate® SEC柱可以使用水或有機溶劑和水的混合物，如甲醇(或乙腈)的水溶液等作為流動相。流動相在使用前必須脫氣處理。

Ultimate® SEC色譜柱的保養
1.溶劑
新的Ultimate® SEC柱中的流動相是90%的乙腈水溶液。長期不用其色譜柱內硅膠填料可能會干涸。此時需要用10-20倍柱體積的超純水進行沖洗以確保色譜柱的重新活化。然后可根據所需的流動相平衡色譜柱。流速由0.2mL/min逐漸升高至所需的流速，直至基線穩定為止。如果柱壓和基線波動較大，這可能是氣泡進入了色譜柱。這時可用較高流速沖洗色譜柱2-5min，例如對于7.8×300mm的色譜柱可采用流速2.0mL/min。
2.pH
為了獲得*的分離效果和延長柱的使用壽命，盡量使用pH在2-8.5范圍內的流動相。
3.壓力
Ultimate® SEC柱可在高至6000psi的壓力下使用，但正常的操作壓力應當低于2000psi。長時間在高壓下使用會損壞色譜柱和輸液泵。一般情況下，柱壓會隨著色譜柱使用時間的增加而逐漸升高。此時建議將色譜柱反接后用合適的溶劑進行清洗、重新活化。
4.溫度
為了獲得zui長的使用時間，*操作溫度為10-30℃。

Ultimate® SEC色譜柱的再生步驟
Ultimate® SEC色譜柱的再生方法根據相關的樣品純度有不同的變化，越是生物大分子，越需要經常地對柱子進行再生，因為它們往往因為具有較大的體積而堵塞色譜柱，如果使用過程中發生柱壓突然升高或者色譜峰的峰型會與柱子發生置換。可以通過注射核糖核酸酶來測試柱子的置換情況。如果核糖核酸酶的峰有拖尾，那么柱子需要做以下處理：
將色譜柱與檢測器斷開；把柱子流路方向反過來，以高比例有機相(甲醇或乙腈)以0.2mL/min的流速沖洗一整夜，用30-50倍柱體積的超純水將色譜柱沖洗干凈。再生之后按照正常方向使用。